CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO industrial y de servicios No. 26
TINCIÓN DE GRAM.
Alumna: Cabrera Díaz Zaire.
Grado: 2° Grupo: "Q"
Grado: 2° Grupo: "Q"
Especialidad: Laboratorio Clínico.
No. Lista: 05
Docente: Fausto Guzmán Ortiz.
TINCIÓN DE GRAM.
En este trabajo se hablará de la tinción de acuerdo a las experiencias obtenidas en el laboratorio de la escuela. Así como se dará una definición de esta y algunos de sus términos para determinar los tipos de bacterias que se pueden encontrar.
1- .¿Qué aprendí?
Aprendí a hacer una tinción de Gram y a observar detalladamente las bacterias del microscopio. Así como que el trabajo en equipo es crucial para que un trabajo salga bien. También aprendí algunos tipos de bacterias y a indentificarlas de acuerdo a su color y forma.
¿Cuánto gané?
De acuerdo con algunos laboratorios.
Exudado faringueo: $119 (Laboratorios Clínicos Azteca)
Cultivo de bacterias: $240
(Clinica Dam. http://www.clinicadam.com/salud/5/003744.html )
2.- ¿Qué materiales ocupé?
·
Materiales
- Mechero de alcohol
- Asa bacteriológica
- Portaobjetos
- Varillas de vidrio
-Pizeta
-Microscopio
- Muestras proporcionadas por alumnos (cultivo, esputo,
sangre)
·
Sustancias
- Cristal violeta
-Solución de lugol
-Alcohol acetona
-Safranina
-Aceite de inmersión
3.- ¿Cómo lo hice?
Procedimiento a detalle:
1.
Limpiar
el portaobjetos con gasas y encender el mechero. Colocar una gota de solución
salina sobre el portaobjetos y luego esterilizar el asa bacteriológica.
2.
Tomar una
pequeña muestra de la cepa y diluirla en el portaobjetos. Posteriormente
esterilizar el asa.
3.
Fijar
la muestra al calor flameándola en el mechero, cuidando no quemar la muestra. Colocar
el portaobjetos sobre un soporte.
4.
Cubrir la
muestra con cristal violeta. Esperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y
enjuagar.
5.
Cubrir la
muestra con solución de lugol y esperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y
enjuagar.
6.
Cubrir la
muestra con alcohol cetona. Esperar que transcurran 5 segundos. Escurrir y
enjuagar.
7.
Cubrir la
muestra con safranina, y esperar que transcurra 1 minuto. Escurrir y enjuagar.
8.
Dejar
secar la muestra. Agregar una gota de aceite de inmersión y observar en el
microscopio a 100x.
4.- ¿Qué resultados obtuve?
Se tincionaron 3 muestras con la técnica de Gram, de Esputo, Sangre y un Cultivo. Los resultados de acuerdo a la bitácora aparecerán debajo.
08- M.S.C – 26/05/2014. Muestra de esputo.
En la muestra de esputo se tuvieron algunos errores y no se
pudo obtener un muy buen resultado en la imagen.
09- E.R.I- 26/05/2014. Muestra de sangre.
La tinción tampoco se realizó bien debido a ser la primera
vez en hacerlo, pero se logran ver algunos
glóbulos rojos y restos de colorante.
10- D.C.N- 26/05/2014. Cultivo de bacteria.
11- D.C.N- 26/05/2014. Cultivo de bacteria utilizando otro método.
El procedimiento fue bien realizado, pero no se obtuvieron
buenos resultados, debido a que solo se observaron manchas de colorante.
*FOTOGRAFÍAS TOMADAS POR ESCOBAR REYES ILSE, CABRERA DÍAZ ZAIRE Y VAZQUEZ FARRET ALEXIA EL 26 DE MAYO DEL 2014.
5.- Investigación científica que sustenta mi trabajo.
Tinción de Gram
La tinción de Gram, también conocida como
coloración de Gram, es una técnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente
en los estudios microbiológicos de lasbacterias. Fue diseñada por
Christian Gram, un científico danés, en el año 1884. El objetivo de Gram era
conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de
bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba resultó todo un
éxito y pronto se convirtió en una técnica muy útil no solo para el estudio de
las bacterias, sino también para poder identificarlas rápidamente en una
infección y seleccionar elantibiótico más
adecuado para tratarla.
La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una
muestra de cualquier origen (esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga
bacterias no identificadas. Los colorantes tiñen la pared de las bacterias de
color morado y, tras unos minutos, se realiza un lavado del colorante. Después
de eso puede que el colorante permanezca en la pared bacteriana o que se haya
ido. En el primer caso permanecería el color morado, y se trataría de
bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un
color rosado, y serían Gram negativas.
Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se
basa la clasificación de la amplía mayoría de las bacterias. Cada uno de los
grupos responde de forma diferente a cada tipo de antibióticos, por eso es una
técnica útil para seleccionar el fármaco antimicrobiano inicial ante una
infección. Hay que tener en cuenta que en ciertas situaciones (como la sepsis)
es muy importante iniciar un tratamiento antibiótico adecuado de forma precoz,
por eso la tinción de Gram se pide de urgencia en muchas ocasiones.
La tinción de Gram también tiene ciertas limitaciones.
Algunas bacterias no tienen pared, como por ejemplo las Chlamidias,
y no se podrán identificar, al igual que los virus. En esos casos la tinción no
coloreará ningún germen. Otro aspecto negativo de la prueba es que no puede
identificar el tipo exacto de bacteria responsable de la infección. Para ello
es necesario realizar un cultivo microbiológico que se acompaña siempre de un
antibiograma para estudiar de forma exacta el antibiótico más efectivo.
¿Cuándo se hace una tinción de Gram?
Se recomienda realizar una tinción de Gram en
todas las situaciones en las que se quiera hacer una primera aproximación en la
clasificación de las bacterias aisladas. Además de realizarla en estudios de
investigación científica, también se realiza en hospitales y clínicas de todo
el mundo ante estas enfermedades:
Neumonías:
se puede recoger una muestra de esputo sobre la que se realiza una tinción de
Gram para identificar microorganismos responsables.
Infección de
orina: se puede utilizar la coloración de Gram en la orina con
sospecha de infección. La muestra debe ser recogida con cuidado para no
contaminarla con bacterias de la vagina o del prepucio.
Uretritis: es la infección de
transmisión sexual más frecuente y suele producir secreción a
través de la uretra, que se recoge para realizar la tinción de Gram.
Meningitis:
la tinción de Gram teñirá las bacterias que estén infectando el líquido
cefalorraquídeo.
Exudado vaginal: aunque en la vagina hay
multitud de bacterias, la tinción de Gram puede teñir todas ellas y ver la
proporción de Gram positivas y Gram negativas. Así se diagnostican las
vaginosis, tan frecuentes en las mujeres con menopausia.
Abcesos: cuando se acumula pus en cualquier lugar se
debe drenar y después planificar la antibioterapia si es necesaria, y para ello
es muy útil saber qué tipo de bacteria es la causante del cuadro.
Sepsis:
en este caso la muestra recogida es la sangre; un tubo pequeño de cada brazo.
Resultados de la
tinción de Gram
Los resultados de la tinción de Gram tardan
entre varios minutos y una hora desde que se recoge la muestra para estudiarla.
No es frecuente que tengas que preocuparte por recogerlos, ya que habitualmente
es el propio médico el que recibe los resultados de la prueba (por teléfono si
es urgente, o con un informe si puede esperar 24 horas). En la consulta, el
médico podrá realizar la interpretación más adecuada del resultado. Si estás
ingresado te los comunicarán durante tu estancia en el hospital, o después si
te han dado el alta médica antes.
La tinción de Gram se informa con la identificación o no de
bacterias. Si hay bacterias, el microbiólogo indicará si son Gram positivas
(púrpuras) o Gram negativas (rosas), qué forma tienen, y cómo se organizan.
Según su forma pueden ser cocos (esferas), bacilos (cilindros finos) o
cocobacilos. Se pueden organizar en racimo o en cadenas; a veces están
dispersas.
Habitualmente el resultado de la tinción de Gram se puede
resumir en bacterias Gram positivas o bacterias Gram negativas. Solo con eso ya
es suficiente para planificar el tratamiento antibiótico inicial.
Días después saldrán los resultados del cultivo microbiológico, con el que se
obtendrá la especie concreta de bacteria y su sensibilidad a los antibióticos;
eso puede hacer que el antibiótico inicial se cambie por otro.
Aunque es una prueba muy útil puede proporcionar falsos
positivos y negativos. Hay que tener en cuenta que la muestra se coge en un
momento concreto y está condicionada por la habilidad del médico o enfermera
que la recoge y por los tratamientos previos del paciente (especialmente los
antibióticos). También hay que tener en cuenta que el resultado de la prueba
depende de la experiencia del microbiólogo que observa la muestra teñida.
(Tinción de Gram, Saceda D., 2014)
<--- En la muestra encontrada se observaron bacterias de color rosado y tonos rojizos.
Bacteria Gram negativa
En microbiología,
se denominan bacterias Gram negativas a aquellas bacterias que NO se
tiñen de azul oscuro
o violeta por la tinción de
Gram, y lo hacen de un color rosado tenue:
de ahí el nombre de "Gram-negativas" o también
"gramnegativas". Esta característica está íntimamente ligada a
la estructura didérmica dada por la envoltura
celular, pues presenta doble membrana celular (una externa y la otra
citoplasmática), lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son
uno de los principales supergrupos de bacterias y
cuando se tratan como taxón se utiliza también el nombre de Negibacteria
o Didermata. Las restantes son las bacterias Gram positivas.
Las bacterias
Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se localiza una
fina pared celular de peptidoglicano,
mientras que las bacterias Gram-positivas presentan sólo una membrana lipídica
y la pared de peptidoglicano es mucho más gruesa. Al ser la pared fina, no
retiene el colorante durante la tinción de Gram.3
Muchas especies
de bacterias Gram-negativas causan enfermedades. Los cocos Gram-negativos
causan la gonorrea (Neisseria gonorrhoeae), meningitis (Neisseria meningitidis) y síntomas
respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros.
Los bacilos Gram-negativos
incluyen un gran número de especies. Algunos de ellos causan principalmente
enfermedades respiratorias (Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa), enfermedades
urinarias (Escherichia coli, Proteus
mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens) y enfermedades
gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis,Salmonella
typhi). Otros están asociadas a infecciones nosocomiales (Acinetobacter baumanii).
Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan
enfermedades. Una de las varias características únicas de las bacterias
Gram-negativas es la estructura de la membrana externa. La parte exterior de la
membrana comprende un complejo de lipopolisacáridos cuya parte lípida actúa
como una endotoxina y es responsable de la capacidad patógena del
microorganismo.1 Este
componente desencadena una respuesta inmune innata que se caracteriza por la
producción de citocinas y la activación delsistema inmunológico. La inflamación es
una consecuencia común de la producción de citocinas, que también pueden
producir toxicidad. Si la endotoxina entra en el sistema circulatorio, provoca
una reacción tóxica con aumento de la temperatura y de la frecuencia
respiratoria y bajada de la presión arterial. Esto puede dar lugar a un shock
endotóxico, que puede ser fatal.
Esta membrana externa protege a las bacterias de varios
antibióticos, colorantes y detergentes que normalmente dañarían la membrana
interna o la pared celular de peptidoglicano. La membrana externa proporciona a
estas bacterias resistencia a la lisozima y
a la penicilina.
Afortunadamente, se han desarrollado otros tratamientos alternativos para
combatir la membrana externa de protección de estos patógenos, tales como la
lisozima con EDTA, y el antibiótico ampicilina.
También pueden usarse otras drogas, a saber, cloranfenicol, estreptomicina y ácido nalidíxico.
(Bacteria Gram negativa, N.D, Wikipedia )
* Recuperado el 31 de Mayo del 2014 de http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399. Tinción de Gram, David Saceda, licenciado en Medicina por la Universidad de
Alcalá de Henares.
* Recuperado el 31 de Mayo del 2014 de http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativa. Bateria Gram negativa, N.D.
6.- ¿Qué dificultades tuve y cómo las resolví?
Las dificultades se presentaron en el trabajo en equipo, ya que muchos no contaban con la competencia de saber hacer bien una tinción, ni poder usar el microscopio. Pero se pudieron resolver porque los que si sabíamos, ayudábamos a los demás para que pudieran hacer sus labores.
También hubo dificultades en hacer la tincion debido a que era la primera vez que la realizabamos, pero poco a nos fuimos familiarizando con esta técnica.
7.- Anexos.
*Bitácora de pacientes.
* Resultado al médico.
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